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Fiche 35 : OIL RED O (cyto) ou SOUDAN IV (détection des lipides)

Technique

Cette détection se fait habituellement sur frottis séchés à l’air ou

• Soit : Coupe recueillie et rincée dans l’eau distillée Laver dans une solution aqueuse à 30% de « Carbowax 400 » pendant 1 min. puis dans une solution à 80% pendant 1 min., enfin dans deux bains de « Carbowax 400 * » pur d’une min. chacun.

• Soit : Passer quelques secondes dans l’alcool à 70°, puis mettre l’OIL RED O ** directement sur lame pendant 5 min.

Passer quelques secondes dans l’alcool à 70°

• Coloration nucléaire par l’Hématoxyline de Harris (1 min.)

Rinçage à l’eau

Montage dans l’Aquamount *** ou le Faramount *** et à l’eau

*** Dans ces cas étaler la coupe sur une lame albuminée.

Résultats

• Les lipides en phase liquide (triglycérides, acides gras, cholestérides) sont colorés en rouge vif .

• Lames et fibres élastiques en violet foncé

Réactifs

Oil Red O peut s’acheter chez Merck Réf.11669 ou Oil Red O ou Soudan IV dans le Carbowax 400 Oil Red O ou Soudan IV 1,2 g Carbowax 100 ml

Procédure : Chauffer la solution à 40°. Filtrer sous vide et Refroidir le filtrat à la température ambiante.

Aquamount : Gurr BDH, réf. 3608 G

Faramount : DAKO, réf. 53025

Remarques

Des précautions particulières doivent être prises pour éviter l’évaporation du solvant : les colorations doivent être faites dans des récipients parfaitement bouchés.

La préparation doit être rapidement essorée avant le montage et le milieu de montage placé sur la coupe devra être encore humide.

On évitera d’appuyer sur la lamelle couvre-objet afin de ne pas déplacer les gouttelettes lipidiques de la préparation.

 

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