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Fiche 34a : MAY GRUNWALD GIEMSA (MGG-cyto)

Technique

Les lames doivent être séchées à l’air ou éventuellement fixées dans le méthanol (3 min.) • Mettre le frottis dans une solution pure de May Grünwald (3 min.).

• Puis dans une solution de May Grünwald diluée au ½ dans du tampon à pH 6,8 (3 min.).

• Sans rincer mettre le frottis dans du Giemsa dilué au 1/10 dans le même tampon (20 min.)

Laver rapidement dans le tampon.

Si la coloration est trop rose, faire bleuir en lavant à l’eau courante. Pour la faire rosir, remettre dans le tampon.

Sécher Xylènes ou Toluène (2 bains) Montage

Résultats

Hématies rose-chamois Noyaux (chromatine) rouge-violet et roses, parfois violet-bleu Cytoplasmes du rouge clair au bleu intense, en passant par des tons dégradés de rose, de bleu ou de gris pâle, dépendant étroitement du pH des molécules et des structures colorées.

En Hématologie Hémoglobine des érythroblastes : basophile, éosinophile ou polychromatophile. Granulations des érythrocytes bleu-cobalt Cytoplasme basophile des lymphocytes bleu

Granulations des Polynucléaires Neutrophiles marron Basophiles violet foncé Eosinophiles orangé Granulations azurophiles pourpre En Parasitologie (Paludisme) Noyaux rouge Cytoplasmes bleu

En Cytologie cancérologique Noyau pourpre (nucléole : bleu) Kératine bleu intense Mucus bleu pâle Stroma conjonctif rose fuchsia

Réactifs

Les deux solutions entrant dans la coloration du MGG sont difficiles à fabriquer. Elles sont disponibles dans le commerce : Giemsa (Merck, réf. 09204, R.A.L., réf 3-20 301), May-Grünwald (RAL, réf. 320079) Toutefois voici leurs compositions :

Solution de May Grünwald : Dissoudre peu à peu 0,3 g de May Grünwald dans 100 ml de Méthanol Filtrer

Solution de Giemsa Mélanger 7 g de Giemsa (mélange de Romanovsky) dans 500 ml de glycérol chauffé au bain-marie à 50°. L’y laisser 30 min. en agitant régulièrement. Laisser refroidir. Ajouter 500 ml de méthanol. Mélanger et Filtrer

Tampon Eau déminéralisée 5 l Phosphate monopotassique 1 g Phosphate disodique 5 g Réajuster le pH à 6,8 avec de la soude ou du HCl fumant (goutte à goutte avec précaution).

 

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