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Fiche 29 : ZIEHL sur coupes

Technique

Déparaffiner dans un mélange de Toluène et d’huile de paraffine (2 vol/1 vol). Essuyer la lame avec un papier filtre. Hydrater les coupes

• Recouvrir la lame de Fuchsine de Ziehl filtrée pendant 20 min.

Colorer dans l’Alcool-Acide * à 1%, ou dans l’Alcool lactique à 2% jusqu’à l’obtention d’un fond bleu pâle avant qu’il ne tourne au rose.

Rincer à l’eau courante

• Contre-Coloration soit au Bleu de Méthylène * à 0,5% pendant quelques secondes, soit aBleu Azur II pendant 5 min. jusqu’à ce que le fond soit bleu.

Rincer à l’eau courante puis distillée.

Ne pas mettre dans l’alcool, mais égoutter et bien sécher à l’étuve à 60° avant de monter à l’Eukitt.

Résultats

Bacilles acido-alcoolo-résistants rouge fuchs Fond bleu à vert pâle Noyaux bleu foncé à bleu-vert

Réactifs

Alcool-Acide :

Soit, Acide Chlorhydrique concentré 10 ml Alcool à 70° 990 ml Soit, Alcool lactique (Alcool 95° : 980 ml, Acide lactique : 20 ml).

Mettre la lame dans deux bains successifs, le premier enlève l’excès de colorant et le second doit donner une couleur saumon.

Bleu de Méthylène

Bleu de Méthylène 1 g H2O qsp

Fuchsine Phéniquée de Ziehl , (produit commercialisé par Merck ou RAL) ou : Préparer une solution de Phénol en mélangeant 5 ml de cristaux fondus de Phénol avec 95 ml d’eau distillée Mélanger ensuite 10 ml d’une solution saturée (environ 3%) de Fuchsine basique dans de l’éthanol absolu avec 90 ml de la solution de Phénol préparée précédemment.

Filtrer avant usage

Remarques

Il faut prendre un témoin positif (tissu frais injecté de BCG).

 

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