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Fiche 20 : ORCEINE (Orceine Shikata)

Technique

Déparaffinage

Rincer à l’eau distillée (10 min.)

• Oxyder dans la solution de Permanganate de Potassium * (2 min.) : les coupes deviennent brun foncé.

Laver à l’eau distillée.

Réduire pendant 30 sec dans le Bisulfite de Sodium * : les coupes blanchissent presque immédiatement.

Laver à l’eau distillée.

• Mettre les coupes pendant 30 min. dans la Solution d’Orcéine * à l’obscurité.

Différencier au sortir de l’orcéine.

Rincer à l’eau distillée.

Différencier en Alcool absolu jusqu’à ce que les structures colorées se détachent bien sur le fond incolore.

• Contre coloration à l’Hémalun (quelques min.).

Rincer à l’eau, l’eau lithinée, puis l’eau courante.

• Coloration au Jaune de Méthanyl

Rincer à l’Alcool

Xylènes

Montage

Résultats

Fibres élastiques noires et HBs intracytoplasmique de la cellule hépatique dans l’hépatite B Noyaux bleu foncé Cytoplasmes jaunes (si le fixateur contient de l’acide picrique)

Réactifs

Solution d’Orceïne synthétique : (pH 1 ou 2)

Orceïne 1 g Acide Chlorhydrique 1 ml Alcool à 70° qsp 100 ml

Cette solution est immédiatement utilisable

Permanganate de Potassium

Permanganate de Potassium 1,5 g Acide Sulfurique 1,5 g Eau distillée 100 ml

Préparation : Dissoudre le Permanganate de Potassium dans l’eau distillée et ajouter l’acide sulfurique

Le mélange ne se conserve pas plus de 24 h.

Bisulfite de Sodium : solution à 2,5% dans l’eau distillée

(Pas de restriction de durée de conservation)

Remarques

-  Les coupes ne doivent avoir que 3 à 4  au maximum
-  Filtrer les colorants avant chaque coloration

 

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