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Fiche 19 : OIL RED O ou SOUDAN IV(détection des lipides)

Technique

Cette détection se fait habituellement sur frottis séchés à l’air ou coupes à congélation à partir de pièces fraîches ou fixées dans le formol.

Coupes à congélation de matériel frais ou fixé au formol. Dans ce dernier cas, les coupes seront collées sur lames albuminées.

Alcool à 70° 10 sec.

• La solution d’Oil Red O ** est mise directement sur lame 5 min.

Rincer quelques secondes dans l’alcool à 70°

• Coloration nucléaire par l’hématoxyline de Harris (1 min.)

Rinçage à l’eau

Montage dans un milieu hydrophile (aquamount *** ou faramount ***) et à l’eau

*** dans ces cas, étaler la coupe sur une lame albuminée.

Résultats

• Les lipides en phase liquide (triglycérides, acides gras, cholestérides) sont colorés en rouge vif

• Lames et fibres élastiques en violet foncé

Réactifs

Oil Red O peut s’acheter chez Merck réf.11669 (ou Oil Red O ou Soudan IV dans le Carbowax 400 Oil Red O ou Soudan IV 1,2 g Carbowax 100 ml

Procédure : Chauffer la solution à 40°. Filtrer sous vide et Refroidir le filtrat à la température ambiante.

Aquamount : Gurr BDH réf. 3608 G

Faramount : DAKO réf. 53025

Remarques

Des précautions particulières doivent être prises pour éviter l’évaporation du solvant :
-   L’Oil Red O en solution saturée dans l’éthanol à 70° doit être conservé à l’étuve à 37° dans un flacon soigneusement bouché, et filtré avant l’emploi.
-   Les colorations doivent être faites dans des récipients parfaitement bouchés.
-   La préparation doit être rapidement essorée avant le montage et le milieu de montage placé sur la coupe devra être encore humide. On évitera d’appuyer sur la lamelle couvre-objet afin de ne pas déplacer les gouttelettes lipidiques de la préparation.

NB : Cette technique est plus simple que celle avec Carbowax.

 

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