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Fiche 17b : GROCOTT (micro-ondes)

Technique

Déparaffiner et amener à l’eau distillée • Oxydation par l’Oxyde Chromique * (trioxyde de Chrome) à 5% au micro-ondes (M.O. : 30 sec. position 4) avec un bol d’eau. Laisser reposer au dehors pendant 20 secondes dans l’eau distillée. Bien rincer.

• (méta) Bisulfite de Sodium * à 1% (1 min.) sur lame

Rincer à l’eau distillée.

• Extemporanément, préparer la Solution-fille * du Grocott à partir de la Solution-mère *, à déposer sur lames et mettre au M.O. (1 min. position 3). Apprécier la prise et remettre de 15 sec. en 15 sec. au M.O. (réafficher les sec. et la puissance à chaque fois) jusqu’à l’obtention d’une couleur brun-chamois. Laisser reposer 30 à 45 sec. dans la solution hors du M.O. jusqu’à l’obtention d’une coloration noire du témoin (préchauffage possible sur « décongélation » pour chaleur homogène). Placer les lames dans l’eau distillée. Vérifier au microscope le témoin. Sinon remettre quelques sec. au M.O. NB : Arrêter l’imprégnation avant le stade noir en immergeant les coupes dans l’eau distillée. Rincer à l’eau distillée.

• Virage dans le Chlorure d’or * à 0,1% pendant une min. jusqu’à une coloration grise. Rincer à l’eau distillée.

Hyposulfite de sodium * à 2% pendant 3 min. Rincer à l’eau.

• Contre-coloration au Vert Lumière * à 1% (2min.). Rincer à l’eau distillée, Alcools, Xylènes, Montage.

Résultats

Champignons et Pneumocystis Carinii colorés en noir sur fond vert

Réactifs

Méthénamine (Hexaméthylène tétramine pure) (Probabo 24558 PM 14019)

Solution-mère du Grocott (solution d’argent méthénamine) (à conserver au Frigo)  : Solution aqueuse à 5% de Nitrate d’argent : 5 ml Solution aqueuse à 3% de Méthénamine : 100 ml Il se forme un précipité blanc qui se dissout immédiatement par agitation. Cette solution se conserve pendant quelques mois au frigo à l’abri de la lumière .

Solution de travail (à préparer extemporanément) Solution de tétraborate de soude à 5% 2 ml Eau bidistillée 25 ml Solution mère d’Ag 25 ml

-   Les solutions suivantes sont faites dans l’eau distillée : Acide chromique à 5%, Bisulfite de Sodium à 1%, Hyposulfite de Sodium à 2%,
-   les autres sont faites dans l’eau bidistillée : Chlorure d’or à 0,1%, Tétraborate de Sodium à 5%.

Vert Lumière Solution mère  : Acide acétique glacial 0,2 ml Vert Lumière S F 0,2 g Eau distillée qsp 100 ml Solution de travail  : Solution mère 10 ml Eau distillée 50 ml

Remarques

Prendre un témoin positif : truffe aspergillaire par exemple.

 

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