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Fiiche 17a : GROCOTT

Technique

(la fixation au formol à 10% est recommandée)

Déparaffinage, puis eau distillée

• Oxyder dans la solution d’oxyde chromique * à 5% pendant 1 heure

Laver à l’eau distillée Puis à l’eau courante (10 min) Laver à l’eau bidistillée (4 à 5 reprises) dans une solution aqueuse de bisulfite de Na (1%).

• Placer les coupes à l’étuve à 56° dans la solution de Méthénamine argent * pendant 40 min. (A surveiller).

Au sortir du bain d’argent, rincer soigneusement à l’eau bidistillée

• Virage au Chlorure d’or * (2 à 5 min.)

Rincer à l’eau distillée

Hyposulfite de soude à 2% (Wilder) * (2 à 5 min.)

• Colorer le fond au Vert Lumière * (en solution acétique à 1%) pendant 2 min.

Rincer à l’eau distillée

Alcool absolu, Xylènes, Montage

Résultats

Champignons et Pneumocystis Carinii colorés en noir , sur fond vert

Réactifs

Méthénamine (Hexaméthylène tétramine pure) (Probabo 24558 PM 14019)

Solution-mère du Grocott (solution d’argent méthénamine) (à conserver au réfrigérateur)  : Solution aqueuse à 5% de Nitrate d’argent : 5 ml Solution aqueuse à 3% de Méthénamine : 100 ml Il se forme un précipité blanc qui se dissout immédiatement par agitation. Cette solution se conserve pendant quelques mois au réfrigérateur à l’abri de la lumière .

Solution de travail (à préparer extemporanément) Solution de tétraborate de soude à 5% 2 ml Eau bidistillée 25 ml Solution mère d’Ag 25 ml

-   Les solutions suivantes sont faites dans l’eau distillée : Acide chromique à 5%, Métabisulfite de Sodium à 1%, Hyposulfite de Sodium à 2%.
-   Les autres sont faites dans l’eau bidistillée : Chlorure d’or à 0,1%, Tétraborate de Sodium à 5%.

Vert Lumière - Solution mère  : Acide acétique glacial 0,2 ml Vert Lumière S F 0,2 g Eau distillée qsp 100 ml

Solution de travail  : Solution mère 10 ml Eau distillée 50 ml

Remarques

Prendre un témoin positif : truffe aspergillaire par exemple.

 

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