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Fiche 16 : De GRANDI (GRIMELIUS-BLEU ALCIAN)sans et avec micro-ondes (m.o.)

Technique

Déparaffiner, éclaircir, hydrater jusqu’à l’eau distillée

• Mordancer dans l’acide acétique à 3% pendant 3 min.

• Passer directement dans le Bleu Alcian à 0,5% pendant 30 min.

Rincer les coupes à l’eau courante (10 min.), puis à l’eau distillée

• Mettre les coupes dans la solution de Nitrate d’Argent *
-  préalablement chauffée 1 h à l’étuve pendant 5 ou 6 heures,
-  ou préchauffée au M.O. pendant 2 fois 2 min (sur la position intermédiaire : allure 5)

• Sans rincer, transférer directement les coupes dans la solution d’hydroquinone * préalablement chauffée (10 min. à 60° ou 1 min. au M.O. position basse)

Rincer à l’eau distillée

• Fixer dans la solution d’hyposulfite de Sodium à 5% (3 min.)

Rincer à l’eau courante puis distillée

• Contre-coloration au Rouge Nucléaire (5 min.)

Rincer à l’eau, Montage

Résultats

Mucopolysaccharides acides bleus Noyaux bruns Substances argentaffines et argyrophiles noires Granulations intracytoplasmiques du système APUD noires

Réactifs

Solutions Solution A = Acide acétique  : 1,2 ml dans 100 ml d’eau distillée Solution B = Acétate de Sodium : 2,7 g dans 100 ml d’eau distillée (CH3 COONa, 3H2O)

Tampon à pH 5,6. Mélanger : Solution A : 11 ml Solution B : 89 ml (Vérifier le pH)

Solution de nitrate d’argent : Nitrate d’Argent 100 mg Tampon acétate * 10 ml (0,2M, pH 5,6, au frigo prêt à l’emploi) Eau distillée qsp 100 ml

Solution réductrice d’hydroquinone Hydroquinone 1 gr Sulfite de Sodium 5 gr Eau distillée qsp 100 ml

Remarques

-  Prendre un témoin : intestin grêle ou colon.

-  La verrerie doit être très propre.

 

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