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Fiche 12 : COLORATION de FITE(détection du bacille de la lèpre)

Technique

Déparaffinage dans deux bains d’une solution comportant 2 volumes d’huile de paraffine pour 1 volume de xylène (au moins 7 min. pour chaque bain).

Essuyer l’excès d’huile et tamponner très délicatement la coupe avec du papier filtre (papier buvard fin).

Laver à l’eau courante pendant 5 min. puis rincer dans l’eau distillée.

• Colorer par la Fuchsine phéniquée * de Ziehl pendant 30 min. sur la paillasse sans chauffer.

Lavage à l’eau courante (2 min.) Séchage au papier filtre

• Décolorer dans la solution d’alcool acide à 1% * (ou solution aqueuse d’acide sulfurique pendant 20 sec.) jusqu’à l’obtention d’une teinte rose légèrement soutenue.

Rinçage à l’eau courante pour stopper la différenciation (2 min.)

• Contre-coloration du fond en recouvrant la lame quelques secondes par une solution de bleu de méthylène * à 0,15% jusqu’à ce que le fond soit bleu (5 ou 6 trempages).

Rinçage à l’eau courante puis bien sécher au papier filtre (à l’étuve à 60°) : 3 min. environ Alcool absolu (3 bains) Xylènes Montage de préférence au Baume du Canada plutôt qu’à l’Eukitt

Résultats

Bacille de Hansen : rose sur fond bleu

Réactifs

Alcool Acide à 1% : Acide Chlorhydrique concentré 10 ml Alcool à 70° 900 ml Mettre la lame dans deux bains successifs, le premier enlève l’excès de colorant et le second doit donner une couleur saumon.

Fuchsine Phéniquée de Ziehl (basique produit commercialisé par Merck ou RAL) ou préparer une solution de Phénol en mélangeant : Cristaux fondus de Phénol pur 5 ml Eau distillée 95 ml Mélanger ensuite : Une solution saturée de Fuchsine basique (environ 3%) dans de l’éthanol absolu 10 ml et la Solution de Phénol préparée plus haut 90 ml Filtrer avant utilisation et jeter après usage

Bleu de Méthylène à 0,15% Bleu de Méthylène 1 g H2O qsp Le bleu de méthylène peut être conservé en solution de garde (1,5% dans l’alcool à 95%) et dilué de 1 à 10 avec de l’eau avant utilisation.

Huile de paraffine : Mélange à parts égales d’huile végétale et de xylène. Elle peut être remplacée par de l’huile d’arachide ou de l’huile d’olives, mais les résultats sont moins bons.

Remarques

Prendre un témoin BH positif Marche mieux après fixation au Formol de Zenker neutralisé

 

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