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Fiche 9 : HEMATOXYLINE-ERYTHROSINE-SAFRAN (H.E.S.)

Technique

Déparaffinage (3 Xylènes successifs pendant 5 min puis 2 Alcools à 95° et 100°) Eau courante (1 à 2 min)

• Colorer dans l’Hemalun * pendant 3 à 5 min. (ou Hématoxyline de Harris pendant 4 min.)

Laver à l’eau courante

• Bleuir dans une solution d’Eau Lithinée *

Rincer à l’eau courante

• Colorer dans une Solution aqueuse d’Eosine à 1% * pendant 5 à 7 min. (ou Erythrosine pendant 30 sec., ou mélange Eosine-Erythrosine * pendant 30 sec.)

Rincer rapidement à l’eau courante Alcool à 70° puis 95° Alcool absolu

Solution alcoolique de Safran * (de 1 à 8 min)

Alcool absolu (très rapide) Xylènes ou Toluènes Montage

Résultats

Noyaux bleus à bleu-noir Cytoplasmes roses Fibres musculaires rouge vif Hématies rouge vif Collagène jaune orangé Fibres élastiques roses

Réactifs

Hematoxyline de Harris (cf. fiche Préambule)

Erythrosine : (Erythrosine Merck art 1355) A utiliser dissous à 1% dans de l’eau distillée.

Eosine à 1% : 1 g d’Eosine dans 100 ml d’eau. Conservation à 37°C. Ajouter un grain de Thymol pour éviter la prolifération des germes.

Mélange Eosine-Erythrosine : Eosine à 1% 700 ml Erythrosine à 1% 10 ml Acide Acétique à 1% 4 ml

Solution alcoolique de Safran  : Faire sécher pendant 24h, en étuve à 56°, 20 gr de Safran (en filaments du Gâtinais réf Biolyon réf 10 711). Pulvériser dans un mortier. Faire infuser la poudre de Safran dans 1000 ml d’éthanol absolu pendant plusieurs jours. La solution est prête et doit être conservée à l’étuve où elle se bonifie. Elle doit être diluée au 1/3 pour l’emploi.

(ou faire bouillir 5 grs de Safran du Gâtinais dans 200 ml d’alcool absolu pendant 1 heure, prêt à l’emploi. Garder dans un flacon bouché).

Eau Lithinée Solution aqueuse saturée de carbonate de lithium (ou solution ammoniacale faible sous forme de quelques gouttes d’ammoniaque dans de l’eau) pour bleuir. A changer tous les jours avant chaque série.

Remarques

La coloration avec le mélange Eosine-Erythrosine est la moins instable.

 

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